细胞培养器皿?细胞培养器皿灭菌注意

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目录一览:

细胞培养常用的玻璃器皿有哪几种

(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培养液、血清等液体,常以500ml、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替。

(2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种。用于外周血培养的常用10ml普通圆瓶。两种培养瓶均要求选用优质玻璃制成。

(3)培养皿:用于开放式培养及其它用途。分直径30mm、60mm、120mm等几种。

(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体。常用1ml和10ml 两种。短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种。

(5)离心管:离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为50ml、30ml、15ml;后者则多为10ml和5ml。

(6)其它:如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等。

细胞培养常用器材有哪些?

1. 超净工作台

目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式(垂直式)和外流式(水平层流式)。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。

(1) 侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;

(2) 外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;细菌菌落数平均1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。

2. 显微镜

倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。

3. 培养箱

体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般最适生长温度为37℃,温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时,变不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此,可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是最佳选择。

(1) 恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜,其缺点是只宜于作密闭式培养。

(2) CO2培养箱:目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(常用浓度为5%),易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在100%。

(3) 细胞培养耗材:培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。

4. 烘箱(干燥箱)

用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。

5. 水纯化装置

细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液枪、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。

6. 冰箱

细胞培养实验室必备设备,应专用,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。

普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本。

-20℃低温冰箱、超低温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。

7. 细胞冷冻储存器

储存器常用的液氮容器,根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素:容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度最低文帝可达-196℃,使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发,需注意观察剩余液氮量,及时补充,避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,保证样品安全。

8. 离心机

细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。

9. 天平 

常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用精确度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。答案来自

细胞培养会用到哪些重要的实验仪器?如何做到细胞培养的无菌操作?(

重要的实验仪器蒸馏器、储品柜、超净工作台、水浴锅、三氧消毒杀菌机。细胞培养的无菌操作需要在无菌台上操作。

具体设备如下:

准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。

配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。

培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。

必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。

无菌操作:

1、凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面。

2、靠近酒精灯火焰操作。

3、器皿使用前必须过火灭菌。

4、继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。

5、各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6、吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。

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