【导读】细胞健康网细胞网整理“常用原代细胞培养方案”的细胞简讯，细胞存储、治疗找细胞健康网，原代细胞培养的优点的正文：
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细胞培养一般方法有哪些
细胞培养首先尘袜激分为原代培养和传代培养.
一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；
二、传代培养首先进行细胞复苏:
1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,完全培养基重悬培养,适时换液.
细胞传代:
1.贴壁细胞:
对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.
2.悬浮细胞:
一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换好扮新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其派袜它培养瓶内加入完全培养基继续培养.
如何进行细胞原代培养？
原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细扒前胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。
分散细胞培养大致步骤为：将动物组织从机体中取出离散成单个细胞（常用胰蛋白酶），置合适的培养基中培养，使细胞 得以生存、生长和繁殖简答（注意整个过程无菌）。
组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进春咐清行培养。
原代细胞培养实验原理步骤哪里有？
原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培 养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
操作步骤
（一）胰酶消化法
1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带 入超净台内（或将新生小鼠瞎迟搭在超净台旦兆内）解剖取肝脏，置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如 胶原酶，透明质酶等）。
（二）组织块直接培养法 自上方法第3步后，将组织块转移到培磨拿养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时，轻 轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
【总结】关于“常用原代细胞培养方案？原代细胞培养的优点”的解读完毕，干细胞治疗，免疫细胞存储找细胞健康网，原代细胞培养的优点更多细胞资讯 https://yszxyy.com/
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