细胞伤口愈合实验?细胞划痕愈合实验

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深层伤口一定会留疤,怎么办?科学家从眼药找到新希望!

「医师,这会留疤吗?」想必这是很多人在外伤与手术后最关心的问题之一,毕竟疤痕在外观上和原本的皮肤明显不同,一处理不好就容易引人侧目。因此如何有效除疤,一直是伤口护理中的重要挑战,而近期发表在 Science 上的研究,提供了真正意义上的除疤可能1。

当我们身体受伤之后,发生了什么事?

想除疤,得先了解疤痕是怎么来的,而要知道疤痕从何而来,就要从伤口愈合说起。

当人体组织被各种外力(如切割、穿刺等)破坏其完整性后,就会造成伤口。当人体组织出现伤口后,就会启动伤口愈合这个复杂的生理过程,这其中牵涉多种细胞与生理反应的相互配合2。伤口愈合约可分为三个阶段:

(一)炎症期:发炎、结痂。

当伤口产生后,伤口处的细胞会立刻产生各种细胞激素 引起发炎反应 ,吸引免疫细胞来对抗纯山外来细菌的感染,同时受伤部位因血管破裂,血小板会到伤口处促进血栓的形成,将伤口封闭,以减少伤口受到更多的伤害与感染。

(二)增生期 : 肉芽组织填补伤口

此阶段主要是藉著「肉芽组织」的生长来填补伤口。

肉芽组织由新生的微血管、纤维母细胞、各类免疫细胞和纤维母细胞分泌的胶原蛋白等共同组成, 待肉芽组织上方有新的「表皮细胞」覆盖后 ,棚纤也就是伤口与外界的接触关闭后,就会进入下一个阶段。

受伤后,伤口愈合的过程约可以分为三个阶段。Pixabay

(三)重塑期:胶原蛋白、纤维细胞形成疤痕

此阶段伤口外观虽已愈合,但伤口内部的肉芽组织仍有许多工作在进行。

此时肉芽组织内的微血管和免疫细胞会逐渐减少,纤维母细胞会逐渐分化为纤维细胞,这些举动能让出肉芽组织中的空位,提供更多空间给纤维母细胞所分泌的胶原蛋白。

胶原蛋白和纤维细胞在组织内也会重新建构、排列让组织变得更紧致,进一步收缩伤口的同时增加对抗外力的能力,而这个新生的组织,就是我们所称的「疤痕」。

伤口愈合的三阶段:(a) 炎症期 (b) 增生期 (c) 重塑期。参考文献 2 疤痕没有毛囊、汗腺,弹性也不好

不论是疤痕的外观还是内部,都与原本的组织不同。

以皮肤为例,正常的皮肤必须包含毛囊、汗腺等附属器官,但这些疤痕通通没有,另外,因为疤痕内部胶原蛋白与纤维细胞的排列和正常皮肤不同,也导致疤痕的弹性和强度不如正常皮肤,例如在膝盖、手肘等关节处的大面积疤痕,常会让人难以弯曲。

需要注意的是,疤痕是伤口愈合的自然产物,无法避免!

虽然很多皮肤的小擦伤,只伤及表皮层,愈合后看似与原本的皮肤无异,但其实仍会产生疤痕, 只是这些疤痕对伤口的填补不多也不明显,因此我们会「误以为」没有留疤 ,然而,当我们身体出现伤及「真皮层」等较深的伤口时,疤痕组织对伤口的填补就很明显了。

除疤产品并不是真正的「除疤」

因此, 目前市面上各种除疤的产品与方法,都只能让疤痕在「外观」上更贴近周围的皮肤组织,并不能真正消除疤痕 !真正意义上的除疤,必须在伤口愈合阶段就下手,让疤痕组织不会形成。

想要没有疤痕,必须在伤口愈合时期就处理得当!Wikipedia

不过正如链裤仿前面所说,伤口愈合是一个相当复杂的生理反应,直到这几年才对其中的分子机制有深入的认识2。而近期史丹福大学的研究团队所发表的文章,不仅揭示了疤痕形成背后的关键分子机制,也提供了伤口愈合不留疤的可能性1。

纤维母细胞:形成疤痕的关键

从伤口愈合的三个过程可看出,「纤维母细胞」占据关键的地位。

纤维母细胞除了负责肉芽组织的形成,在伤口重塑期,纤维母细胞也会分泌大量的胶原蛋白,同时自身也会分化为纤维细胞,在胶原蛋白和纤维细胞的重构下让疤痕组织更紧实。

2015年,该团队发表的研究显示,在伤口愈合过程中有两类纤维母细胞会参与,分别是会表达、不表达 Engrailed-1 (EN-1)注1 蛋白质的纤维母细胞:

其中,会表达 Engrailed-1 的 EPFs 就是 形成疤痕的主要细胞 3。

首先,研究团队发现,小鼠伤口中的 ENFs 在伤口愈合期间会转化为 EPFs ,产生更多 EPFs。

小鼠皮肤中同时有 ENFs 和 EPFs,但在伤口愈合的阶段,ENFs 会转化为 EPFs。参考文献1 为什么 ENFs 会变成 EPFs?是外力!

知道 EPFs 的来源后,接着他们想了解是甚么「因素」 *** ENFs 转化为 EPFs 。

由于纤维母细胞在生物体内的功能之一就是感受各种机械外力,并在感受到外力后改变细胞的基因表现,以应付外力,因此研究团队推测:

*** 伤口中ENFs转化为EPFs的因素,就是 皮肤在受伤后因弹性改变所产生的「机械外力 」。

为了证实这个想法,他们将 ENFs 纯化出来并培养在三种不同机械外力的实验环境中,结果显示,纤维母细胞不仅能感受不同的机械外力,在不同的外力下,细胞的表现也不同:

ENFs 在低机械力培养 (3D Hydrogel) 下,不会转换为 EPFs;在高机械力 (TCPS) 下会转换为 EPFs,而这个转换可被力学讯号阻断剂 (Y-27632) 逆转。参考文献1

科学家在小鼠实验时也得到类似的结果,当对小鼠的伤口施加拉力时,愈合的伤口内 EPFs 的数量会增加,同时,小鼠的疤痕组织也更厚,而这个结果,同样可以被力学讯号阻断剂逆转。

切断讯号!不告诉细胞伤口有受力

上面的实验证实了,机械拉力可以 *** 纤维母细胞表现 Engrailed-1,促使疤痕形成,那如果阻断机械拉力讯号的传导,是否就能防止疤痕形成?

顺着这思路,研究人员找到一个美国 FDA 核准用于治疗眼疾的药物 Verteporfin注2,Verteporfin能封锁细胞用于感应机械力讯号的关键蛋白质,达到阻断机械讯号传递的能力。

小鼠实验显示,在伤口上辅以 Verteporfin,对于伤口的愈合可谓是「非常有效」!

前面有提过,疤痕不会产生毛囊和汗腺等皮肤附属器,其弹性和强度也较差。但加入 Verteporfin 后,愈合的伤口不仅能长出毛发,汗腺也能正常运作,其弹性和强度也和正常皮肤相当,在显微镜下观察时,也无法分辨愈合的伤口和原本皮肤之间的差异。

另外从分子层面来看,未加入 Verteporfin 的愈合伤口,其 EPFs 的数量远高于加入 Verteporfin 的愈合伤口,显示 Verteporfin 确实能抑制纤维母细胞表现Engrailed-1。

Verteporfin 能让愈合的伤口长出毛发。参考文献1

综合以上的结果,研究团队整理出影响疤痕形成的分子机制和因素:

Engrailed-1 在纤维母细胞中的大量表现,是疤痕形成的关键因素。而伤口处的机械拉力能 *** 纤维母细胞大量表现 Engrailed-1 ,只要抑制这个机械拉力的 *** ,就能有效抑制 Engrailed-1 表现,并让小鼠实现伤口处的「无疤痕愈合」。

研究团队揭示影响疤痕形成的分子路径与因素。参考文献1 如何愈合不留疤?研究长达三十年的问题

研究团队的主持人 Michael T. Longaker 教授是一位整形外科医生,1987年,Longaker 还在胎儿外科手术室实习时,他的导师给了他一个作业:为什么胎儿皮肤上的伤口能不留伤疤地愈合,而儿童和成人的皮肤却做不到?

「这个问题我想了一年,后来变成四年,再后来就变成了几十年。自此之后,为了回答这个问题,我的研究扩展到许多其他领域。我始终想知道,伤疤是怎么形成的!」Longaker 教授如此说道4。

借由研究这篇文章的结果,现在的我们可以一窥其中的可能了: 胎儿的皮肤不像儿童和成人那么有弹性,因此受伤后皮肤也不会因弹性改变而产生机械拉力 。在没有机械外力 *** 的情况下,胎儿伤口处的纤维母细胞自然不会表现 Engrailed-1,也就能达到无疤痕愈合了。

未来,有疤痕说不定是件很稀有的事!

若这项研究的发现能应用到其他组织上,在医学上的伤口处理,将带来非常大的突破,毕竟疤痕在其他组织中同样是「异于」原始组织的,过多的疤痕会严重影响组织甚至器官的功能,例如心脏和肝脏在受损后的纤维化问题。若能透过这个机制达成无疤痕愈合,将是众多病患的福音!

不过在进入临床试验前,势必得在动物实验中进行更多测试,研究团队也表示他们已着手这方面的研究了。

或许未来,伤口不留疤是伤口护理的标准流程,疤痕已不再是需要遮掩的东西,有疤痕说不定是一件很酷、很稀有的事呢!

注释

求助:谁能告诉我细胞伤口愈合实验和细胞划痕实验是不是一个概念

两瞎胡雹个是同一个实验的。测定迁徙来说磨帆,划痕试验即可。而要是测定侵袭的话,现在多采用MATRIGEL铺底的做塌TRANSWELL小室实验进行。

成熟细胞为了伤口的愈合,做的会像胚胎细胞一样吗?

身体细胞再一次显示出了意想不到的可塑性:在一高银种被称为“涎腺病”的新伤口愈合中,成熟细胞可以恢复到胚胎细胞状态。刚开始胚胎只是一个独立细胞,随着时间推移将会分裂出不计其数个细胞。在分裂过程中,这些早期非特化的细胞疯狂地增殖,而后逐步分化出身体各个组织。随着胚胎不断成熟,胚胎干细胞开始各司其职,不断分化成各种细胞系前体,进而产生更成熟的细胞:血细胞、神经细胞、肌肉细胞、肠细胞。这些组织的主要功能会在胎儿出生后发生变化,因为生物体适应了子宫内的生活。

博科园-科学科普:当来到现实世界时,要使用肺呼吸空气和消化系统处理食物。但仍有一些细胞群体保留了其最初的可塑性。比如帮助维持日常组织和愈合伤口的成熟干细胞。当然,成熟干细胞并不是唯一保持可塑性的细胞。当人体进行修复时,如有需要,一些特殊的细胞可以“去分化”,重新进入类似于干细胞状态。新的研究结果表明,细胞可塑性可能远比科学家们想象的复杂。三个研究小组发现,在组织再生过程中,成人干细胞(以及类似的去分化细胞)这一解决枝念梁方案对于愈合一些伤口是远远不够。但是受损组织的细胞恢复到胚胎细的状态可以做到。

1、原子弹和自我更新的细胞

20世纪初,科学家们从理论上推测红细胞、白细胞和血小板来自于普通、更原始的干细胞。直到20世纪50年代和60年代,研究人员才能为推测提供确凿证据,并开始描述其独特特性。第一批干细胞的发现与1945年广岛和长崎的原子弹爆炸有关。那时医务人员观察到,暴露在辐射下的幸存者的白细胞数量急剧下降。在小鼠身上的实验表明,骨髓移植可以减少辐射带来的后果。

几十年后研究人员解释了为什么骨髓移植能够治疗白细胞数量减少的问题:因为骨髓中的细胞既既能自我更新,又能分化成各种特殊血细胞谱系。当分化细胞分裂时会衍生出自己的两个副本,不同类型的细胞,分裂次数有一定限度。但从骨髓中分离出的干细胞则不是这样。当干细胞分裂时,分裂时间非常长,分裂次数也就越多。此外这些分裂并不对称:每个干细胞不仅能产生自身副本,而且还会产生出子细胞。子细胞会成为特定类型的血细胞。

在后来的研究中,研究人员发现干细胞还存在于其他器官之中。汉斯·克利弗斯——荷兰胡布雷希特研究所的分子遗传学家,世界顶尖的干细胞专家之一说:这为观察其他哺乳动物组织提供了模板实验。试图将对固体组织的观察纳入(血液干细胞)层次模型的尝试,未必会有好结果;这导致了理论、术语、实验方法混乱和激烈的辩论,因为这一方法还存在许多漏洞。

2、可塑性

当克利弗斯写下这些话时,关于干细胞的概念已经在进行大规模改革。1990年代末,从人类胚胎干细胞分离和培养实验首次透露,胚胎干细胞不同于成熟干细胞,它只能产生原生组织中的细胞类型(例如骨髓中的血液干细胞可能产生中性粒细胞,但不能在大脑中分化成神经细胞),胚胎干细胞具有成为体内任何细胞类型的潜力。与此同时,在骨髓以外组织中发现的成体干细胞似乎并不总是与造血干细胞作用相似。

20世纪90年代和2000年代在肠道中发现的一些特征表明,某些干细胞群体可以比那些存在于骨髓中的干细胞群体复制得更加活跃,并且有时可以对称地分裂。一些器官,包括胰腺和肾脏,似乎没有完全作为干细胞发挥作用的细胞群体,这意味着在某些情况下,这些组织中的其他细胞可能必须承担茎状功能。寻找作为物理实体的干细胞可能需要被寻找干细胞功能所取代。

证明这种可塑性的明确证据于在2006年出现,当时日本京都大学的山中信彦和高桥一夫从成年小鼠身上提取了结缔组织细胞,并且通过仅向它们导入四个基因,成功地清除了结缔组织细胞,并将它们转化为胚胎样干细胞(这项工作最终让山本获得诺贝尔奖)。科学家们迅速跟进研究是否也能有所收获。这一现象似乎确实发生在肿瘤形成过程中,猛运癌症有干细胞,以及由突变驱动到更像干细胞状态的分化细胞。

但是这样的过程是否也代表某种有序的、健康的过程?答案是肯定的,全身细胞类型——皮肤、肺、胃,在暴露于炎症和正常干细胞损伤时可以去分化。虽然最近分化的细胞特别容易在这些情况下重新到达干细胞起源,但研究也表明,细胞甚至进一步沿着专门化途径可以回到最初状态。不久前,由荷兰伊拉斯马斯大学医学中心遗传学家里卡尔多·福德领导的一组研究人员概述了一种这样的细胞类型——肠道中的Paneth细胞,它分泌控制肠道细菌组成和消化健康的分子。

在损伤后会失去正常的基因表达,但却有利于茎状表达。这些细胞通常根本不分裂,但是一旦它们被诱导进入这种茎状状态,就会像干细胞一样快速增殖,产生自身的复制品和分化细胞。在其他细胞系中也证实了类似的结果。一些实验室甚至试图在去分化过程中捕捉细胞。细胞比我们想象的更具有可塑性,对损伤反应能力也更强。剑桥大学癌症研究人员西蒙•布扎基说:现在每个人都在说,只要能推动这一进程,所有细胞都能变成干细胞。

3、恢复到胚胎细胞状态

但是这种转变在分子水平上究竟是怎样的呢?特别是考虑到干细胞概念变得十分复杂,去分化细胞的“茎状”状态到底需要什么?最近几篇论文,提供了令人信服的证据。一些分化细胞可以瞬时表达一种发育基因程序,这种程序不仅能帮助细胞回复到成熟干细胞状态,还可以回到类似胚胎发育状态。回顾过去,这些发现可能并不令人惊讶:研究蝾螈和其他两栖动物(组织再生的范例)的研究人员看到,这种现象一直以宏大的规模发生。

通过从受伤部位上形成的芽状结构来激活发育程序,这些生物可以再生整个肢体-骨骼,肌肉,软骨。但是人类和大多数动物都不能产生这种组织。科学家们推测,组织再生和癌症相关的去分化过程与激活某种胚胎或发育途径相关。但是,胚胎基因活性的研究结果好坏参半。南加州大学研究肾脏干细胞研究员安德鲁·麦克马洪说:这是个很有吸引力的想法,但坦白说,这方面的证据并不存在。

因此,这些最新发现的重要意义之一是,研究人类和其他动物再生的研究人员可能正在寻找错误的迹象:与其寻找胚胎基因,还不如在开发后期寻找少量胚胎标记。加州大学旧金山分校的研究人员李察·洛克斯利和奥菲尔`克莱因最初并不打算这样做。洛克斯利是一名寻求更好地了解过敏和免疫系统的免疫学家,他希望追踪干细胞在小鼠肠道对寄生虫损害反应中所扮演的角色。

洛克斯利说:但我们很快就看到了整个事情的进展,曾期望靠近蠕虫钻入组织的干细胞变得更加活跃,而后产生新的血统并进行必要修复。相反,用于鉴定这些干细胞的遗传标记完全消失。随着细胞数量减少,伤口周围的细胞分裂速度也比平常快。这表明,也许这些细胞已经转变到一个新损伤反应状态。2016年比利时布鲁塞尔大学生物化学家玛丽-伊莎贝尔·加西亚领导的小组发表了《发展》一书,表明小鼠受损的胃组织重新表达了先前在胚胎胃细胞的前体细胞中鉴定的蛋白质标记。

最近,由哥本哈根大学分子生物学家基姆延森领导的研究人员在肠道发炎的小鼠身上找到了支持这一理论的证据。再生组织不仅表达了Sca-1标记物和胚胎程序的其他特征,而且暗示来自细胞外基质的机械力包围和支持了t.HE细胞激活启动修复的信号通路。这些结果表明,当有炎症或病变样损伤,它就像一个安全系统,并且从其发育时期就已经存在。

4、现实的房产问题

胚胎系统很快就建立了属于自己的房地产,你只是想把风琴布置好:街道通向哪里,电力管道通向哪里,管道通向哪里。在维修中,游戏的名字也是关于快速增加电池的数量,使它们尽可能灵活机动,最重要的是把伤口补好,并指出这是修复损伤的最有效的方法。不管是在心脏病发作后的心肌中还是在严重烧伤后的皮肤中。如果能使用不昂贵的方法来覆盖房地产,那么谁会在乎你是否用胚胎心脏细胞造心脏呢?

这种现象在生物学中一次又一次地发生。因此修复组织应该使用与最初构建组织相同的途径和模式。现在似乎在哺乳动物的肠道中也发生了类似的事情。不幸的是,专家们认为癌症是一种慢性炎症疾病。当成熟细胞恢复到像胚胎细胞那样长寿的增殖状态时,它们获得突变机会就增加了。也许这些突变中的一个或多个最终可能导致细胞陷入其更多的胚胎修复模式,阻止它们分化回它们的特殊身份,并导致肿瘤增殖失控。

这个理论得到了一些支持:患有炎症性肠病和某些类型的身体创伤患者患癌症的风险增加。现在研究再生或癌症期间能够去分化的全身细胞专家明确发现调用了更多的胎儿状态来促进这个过程。圣路易斯华盛顿大学的生物学家詹森·米尔斯说:我认为它们没有寻找胎儿标记,但我敢打赌它们在那里,我不认为任何之间都有联系。

5、新的细胞过程

越靠近胚胎状态就有越多的细胞变得相似,因此可以通过检测这一过程来找到再生或癌症细胞标记。米尔斯将其比作保守的细胞过程,如有丝分裂(细胞分裂)和凋亡(程序性细胞死亡)。本着同样的精神,同研究团队们创造了一个词来形容组织修复和癌症中的去分化过程:“脂肪变性”或“回到生殖状态”。今年2月发表在《EMBO》上的一篇论文中,团队概述了细胞如何通过看似保守的路径序列,恢复到更原始、快速分裂的状态。

胃中的胃主细胞和胰腺中的成熟腺泡细胞都在各自的组织中发挥分泌功能,在损伤后会发生类似的变化:失去相同的标记,表达相似的基因,变得更小更像胚胎细胞。在这两种情况下,细胞首先降低其分化特征,然后重新分配其能量以支持复制行为。到目前为止主要关注细胞生物学以及每个细胞的结构和信号机制,而不是胚胎细胞。研究团队试图更全面地描述唾液酸增多的过程时,洛克斯利的研究能够引领他们前进。

当然,要巩固这些想法还有很长的路要走。例如克莱因,洛克斯利,延森 和加西亚,需要弄清楚是什么触发了实验中观察到的类似胎儿的反应,是来自特定的细胞类型还是所有类型,以及这些诱导细胞与最初被抑制干细胞之间的关系。加西亚对这些事情特别感兴趣:再生的再分化阶段是如何运作。

人体受伤后,伤口是怎么愈合的?显微镜下会看到什么?

引言:相信每个人在日常的生活中都会出现受伤的情况,那么一旦受伤的话就会出现伤口,那么很多人就会有疑问了,那么人在出现伤口之后,伤口都是自己怎么衡蠢愈合的呢?现在小编就来给大家详细的回答一下。

一、人体在受伤之后,伤口是怎么愈合的?

人体在出现伤口咐物陪之后,伤口的第1个表现就是会开始出血,因为在这个时候身体会大量的分泌血小板来止血,之后便会出现大量的白细胞来处理细菌和断裂的血管。并且在之后的一天到两天的过程中,还会伴有红肿发热和疼痛的症状,那么之后保护伤口的痂皮就会开始形成,之后伤口皮肤下组织的细胞也会开始增生,之后会牵拉伤口边缘向中心移动从而来缩小伤口,这个过程一般在4天左右,之后伤口就会自己愈合的。

二、伤口的愈合过程是什么样的?伤口在出现几天之后,伤口的底部就会长出芽组织来填平伤口,并且在这个时候伤口下的毛细血管和神经都在生长,并且要注意的是,在这个时候伤口会出现很痒的情况,一定不能用手去挠。之后纤维母细胞就会产生胶原纤维,并且这种物质会越长越多,最终形成瘢痕,然后就会让伤口变得牢固起来。之后就是伤口的成熟阶段,在这个阶段新生的组织会慢慢获得力量和灵活性,尤其是胶原纤维组织,它的重塑性和拉伸强度也在上升,从而会使伤口更快的愈合,然后长出新的皮肤。

一定要注意,在受伤的时候不能吃辛辣刺激性的食物,蚂者要吃一些清淡的食物,同时要补充一些身体所需要的微量元素,从来保证伤口更快的愈合,从而使自己的皮肤恢复到正常的状态。

创伤愈合实验与细胞凋亡之间有什么联系

细胞凋亡检测可以:(1)用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究;(2)应用于临床诊疗,新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗腊正;(3)对相关疾病碰局贺的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。

荧光探针双标记法

实验原理

本实验用1μg/ml 三尖杉酯碱HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双笑派重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。

三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。

细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA中,使坏死细胞着色,凋亡细胞和活细胞不着色。而一些活细胞染料由于为亲脂性物质,可跨膜进入活细胞,因而可进行活细胞染色。Hoechst33342是一种活性荧光染料且毒性较弱,它是双苯并咪唑的一种衍生物。与DNA特异结合(主要结合于A-T)碱基区),显示凋亡细胞和活细胞。凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。

实验材料

人早幼粒白血病HL-60细胞

试剂/试剂盒

三尖杉酯碱 Tris-Hcl EDTA缓冲液 碱性裂解液 SDS 醋酸钠 异丙醇 乙醇 溴酚蓝 蔗糖指示剂 TBE电泳缓冲液 琼脂糖 溴乙锭 PI母液 Ho33342母液

仪器/耗材

荧光显微镜 电泳仪 电泳槽 微量加样器 离心管 载玻片 盖玻片

【总结】关于“细胞伤口愈合实验?细胞划痕愈合实验”的解读完毕,干细胞治疗,免疫细胞存储找细胞健康网,细胞划痕愈合实验更多细胞资讯 https://yszxyy.com/

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