293e细胞?293e细胞 表达蛋白

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如何养293、293T系列的细胞?

将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM,混匀,不能州卜吹打,分装2瓶。

如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。闹迹滚如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动,竖液余立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min。

扩展资料:

注意事项:

1、尽量用早期的细胞,传代太多状态不好,产毒也不好,贴壁困难。

2、塑料的瓶子,DMEM +10%的小牛血清即可,要求并不高,ATCC上有详细的培养方法。

3、主要是传代,胰酶消化点到即止,不能和其它成纤维细胞一样。

4、细胞代数越高生长越快,同时性状和原代差别也更大。一般2-3天传代一次比较合适。

5、传代时细胞密度在80%左右比较好,如果超过90%融合再传会影响细胞状态。

参考资料来源:百度百科-293细胞

293e细胞和293f细胞的区别

,这是不可能的,癌细胞是一种变异的细胞简此弯,是产生癌症的病源,癌细胞与正常细胞不同,有无限增殖、可转化和易转移三大特点,能够无拦闷限扒基增殖并破坏正常的细胞组织。因此难以消灭。

怎样培养与选择293细胞?

。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微仿举缓载体培养、无血清悬浮培养。这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长,也可生长在血清浓度降低的培养基中。单层培养细胞在5-10%FBS-DMEM中能生长很好。一般来讲,1:10传代后,一周可以长满。严禁答绝过度生长,这点很重要。因为会导致细胞密度加大和堆积,影响病毒斑的形成和转染,传代时也不易打散。悬浮的293细胞很容易大规模培养,但不容易长期保持稳定。293细胞在传代120次以后,其表型可能改变,生长状况不再完全是单层的了,偶尔会形成局部的细胞成团聚集,应立即抛弃,重新引入新传代的细胞。 293细胞培养特性: 1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9~7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。 2、传代:倒去废液,PBS洗一次(轻),用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化,生长良好细胞,培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s,然后吸去,再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化,反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。12小时-24小时90%以上细胞贴壁。293细胞传代时机为达80-90%汇合,传代比例为1:3。 3、293细胞在低代时容易贴壁,生长良好,在传到几十代以后,易聚集成团,且贴壁不牢,用PBS冲洗时即可能脱落,即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液,最好购入时先大量冻存。 4、复苏 293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%~80%时消化冻存,复苏时将其全备模部接种至2个50ml瓶中时较为合适。刚复苏的293贴壁很慢,复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适,如果用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。 5、转染:体外应用293细胞进行细胞转染时,如果是采用磷酸钙转染,一定要注意293细胞不要全部长满细胞培养盘,长满细胞时加入磷酸钙就会使293细胞大片的脱落,最好是当293生长到1/2或2/3时进行磷酸钙转染,可以避免细胞的大量脱落。 其它的经验:1、用大瓶培养较小瓶要好,可能是更有利于293均匀的分布,利于营养的摄取 2、培养液要新鲜,每次只配1000ml,分为2-4瓶,不用的培养液,冻存在-20度, 3、要及时传代,最好是细胞基本铺满培养瓶底部,但是细胞之间还没有完全贴紧,总是多少有空隙的时候最好。 4、如果细胞贴壁不好,可能是消化过久,或是培养瓶不够干净,当然要除外细胞污染。 5、如果使用用玻璃培养瓶或皿,可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿,方法是将明胶加入培养皿,使之浸泡到底面的各个部分,然后吸出,置超净台内晾干即可使用。这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。如果是新的塑料培养瓶就不用处理。 培养基;GIBCO DMEM粉剂,加双抗,HEPES,NaHCO3 配置高糖的DMEM培养基1000ml, 1.一袋DMEM培养基(GIBCOBRL)用去离子水溶解 2.加入NaHCO3 2.0g 3.加入谷氨酰胺 0.146g(终浓度为5mM) 4.加入青霉素10万U(终浓度100u/ml),链霉素6.5万U(终浓度100u/ml) 5.定容900ml 6.过滤除菌、分装到两个消毒的500ml瓶子中 7.加入灭活小牛血清100ml。谢谢采纳!

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