保存细胞?保存细胞用的液氮的温度为

细胞之家 274 0

【导读】细胞健康网整理“保存细胞”的细胞科普,细胞存储、治疗找细胞健康网,保存细胞用的液氮的温度为的正文:

目录一览:

细胞的冷冻和储存

细胞生长时的表型会发生改变或漂变,所以细胞必须计数,计数后应马上冻存。

冷冻细胞前

1 检查冷冻细胞所需试剂蚂陵和器具是否备齐。

2 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。

3 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。

冷冻细胞

1 将培养基中的细胞培养至对数生长期。

2 进行活细胞计数,不要冻存死细胞比例高达20%以上的细胞。

3 决定冻存量,安排需要几个冻存管。

冻存细胞在融化时要稀释10 倍,而稀释后的液体是5X种子液。

例如:如果种子液的密度为5.0 X 105 个/ ml, 那么融化后重新悬浮细胞时细胞宏物拍的密度为2. 5 X 106 个/ ml, 所以冻存细胞时的细胞密度为2.5 X 107 个/ ml 。

1 准备好冷冻培养基, 分装成1 ml, 冻存培养基通常包括一般培养基、10%~20%血清、5%~10%的甘油或二甲基亚砜。如果你不清楚用什么,那么就使用20%的血清和10%的二甲基亚砜。

2 在冷冻培养基中用移液管小心吹打粒状沉淀。

3 每个冻存管中分装1 ml 冻存培养基,放置在冰上操作。

4 把冻存管放入冻存盒中,做好标记,放入-60C 或更低温度的冰箱,放置16~24 小时。

5 倒些液氮至冰盒内,把细胞从冰箱转移到液氮罐之间要把细胞放在这样的冰盒内。如果没有现成的液氮,可以把细胞放在干冰上。

6 将细胞放置在合适的位置,立即做好记录。

液氮的使用

1 细胞常常保存在液氮罐或是液氮制冷柜中,但是要每隔几个星期补充液氮

2 自动填充液氮的罐子,必须定期检查,以保证管道的畅通以及液氮罐没有空掉。

3 在操作液氮罐内容器时要戴好厚手套,否则会冻伤手臂。

4 从液氮罐内拿出细胞时至少也应戴上乳胶手套

5 不要在液氮罐内悬吊物品,也不要吸入气化后的液氮,用手挥开液氮后,就能看见液面了。

6 戴好保护眼睛的眼罩,以免操作冻存管时,冻存管爆炸溅伤眼睛。

7 决不能把没有拧紧的管子放入液氮中,而且要提前找负责液氮罐管理的人员确定位置,不要乱放。

8 不要关闭警报,定期检查。

9 如果听到了液氮罐的报警声,立即通知实验室管理人员。如果是周末或凌晨,则先检查确认是否是由于液氮面过低或温度过高引起的报警,蔽羡再联系负责液氮罐的人员。

细胞存储有什么意义?

细胞是生物体基本的结构和功能单位。细胞储存是通过一定的方法,将细胞保存一定的期限,保证细胞的功能和活性不受明显的影响。

细胞存储意义还不止于干细胞存储。免疫细胞存储、成纤维细胞存储等,都是现在流行、已经科学证实可行的细胞保健轿乱旦方式。免疫细胞是人体健康的卫士,2018年获得诺贝尔奖的癌症免疫治疗,说的就是免疫细胞的功能和作用。

细胞冻存的注意事项

细胞培养的闭扰传代及日常维持过程中,在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大陪雀量的耗费,而且细胞一旦离开活体开始原代培养,它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。

因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中,温度达-196℃,理论上储存时间是无限的。

提取的单个核细胞如何短期保存

1将细胞置于低温环境中,例如4°C的冰箱或液氮罐中。这种方法可以有效地减滑滚缓细胞代谢和生长,并可保持细胞形态和结构的完整性。

2、在细胞培养基中加入抗生素等防腐剂,以避免细菌污染和细胞毁档死亡。此外,还可以在细胞培养基中添加一些营养物质和生长因子,以促进细胞的存活和增殖。

3、使用液氮冷冻法将细胞保存在液氮中,这种方法可以长信余余期保存细胞,并可保持其相对完整性和功能性。

如何冻存细胞

一、材料

(明模岁一)仪器

1.

净化工作台

2.

离心机

3.

恒温水浴箱

4.

冰箱(4℃、-20℃、-70℃)

5.

倒置相差显微镜

6.

培养箱

7.

液氮冰箱

(二)玻璃器皿

1.

吸管(弯头、直头)

2.

培养瓶

3.

玻璃瓶(250ml、100ml)

4.

废液缸

(三)塑料器皿

1.

吸头

2.

枪头

3.

胶塞

4.

移液管(10ml)

5.

15ml离心管

6.

冻存管(1~2ml)

(四)其他物品

1.

微量加样枪

2.

红血球计数板

3.

记号笔

4.

医用橡皮膏

5.

移液枪

(五)试剂

1.

D-Hanks液

2.

小牛血清

3.

培养液

4.

双抗(青霉素、链霉素)

5.

胰蛋白酶(0.08%)

6.

1NHCl

7.

7.4%NaHCO3

8.

DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油

二、操作步骤

(一)细胞冻存

1.

配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;

2.

取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶激睁把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;

3.

离心1000rpm,5min;

4.

去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;

5.

将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5

ml;

6.

在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;

7.

冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/

min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/

min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h

,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

(二)

细胞复苏

1.

从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。

2.

从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细码灶胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀;

3.

离心,

1000rpm,5min;

4.

弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养;

5.

次日更换一次培养液,继续培养。

三、注意事项

1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;

2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;

3.冻存和复苏最好用新配制的培养液。

【总结】关于“保存细胞?保存细胞用的液氮的温度为”的解读完毕,干细胞治疗,免疫细胞存储找细胞健康网,保存细胞用的液氮的温度为更多细胞资讯看 https://yszxyy.com/

专注干细胞治疗、免疫细胞存储

长按复制微信号:13980848276 加好友

13980848276 点击电话咨询

美呗细胞

抱歉,评论功能暂时关闭!