单细胞培养的方法?单细胞培养的方法有哪几种

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目录一览:

细胞培养一般方法有哪些

细胞培养首先尘袜激分为原代培养和传代培养.

一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存;

二、传代培养首先进行细胞复苏:

1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.

2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液;也可复苏当时离心(1000rpm 5min左右)后,完全培养基重悬培养,适时换液.

细胞传代:

1.贴壁细胞:

对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心(1000rpm 5min左右),新鲜培养基重悬沉淀,加入完全培养基后继续培养或实验.

2.悬浮细胞:

一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度或需更换好扮新培养基,可先离心(1000rpm,5min左右)后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其派袜它培养瓶内加入完全培养基继续培养.

单倍体细胞的培养有哪几个方面?

单倍体细胞培养包括花药培养、小孢子培养和未受精子房及卵细胞培养三个方面,其中花药培养与小孢子培养是体外诱导单倍体的两条主扒培要途径。

二者具有不同的含义,前者属于器官培养的范畴,后毕皮者则是典型的单细胞手此差培养方式,但其培养宗旨均是诱导花粉发育为单倍体,快速获得纯系或隐性突变体。

单细胞培养的方法有哪些?各有什么特点?

1.转瓶培养

这个比较老的工艺,在逐步淘汰,不过投资少,技术含量低,人员经少量培训就可以操作。

2.悬浮培养

非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。

细胞悬浮于培养基中生长或维持。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单,只要增加体积就可以子。深度超过盯碰皮5mm,需要搅动培养基,超过10cm,还需要深层通入CO2和空气,以保证足够的气体交换。

通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。

利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点,比如在培养过程中,植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布,而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响,从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点,当植物的组织在液体培养基中生长时,我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。

一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡,一般可用100~120 r/min 的速度进行。由于吵模液体培养基的旋转和震荡,使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的,既有游离的单个细胞,也有较大的细胞团块,还有接种物的死细胞残渣。

在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养,因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养凯差物来说,细胞在培养到第18~25d 时达到最大的密度,此时应进行第一次继代培养。在继代培养时,应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系,就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作,特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株,即可获得携带有目标基因的个体。

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