【导读】细胞健康网整理“细胞培养冻存”的细胞科普，细胞存储、治疗找细胞健康网，细胞培养冻存管生产厂家的正文：
目录一览：
- 1、细胞的冷冻和储存
- 2、细胞冻存的操作步骤是什么？
- 3、如何冻存细胞
细胞的冷冻和储存
细胞生长时的表型会发生改变或漂变，所以细胞必须计数，计数后应马上冻存。
冷冻细胞前
1 检查冷冻细胞所需试剂蚂陵和器具是否备齐。
2 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。
3 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。
冷冻细胞
1 将培养基中的细胞培养至对数生长期。
2 进行活细胞计数，不要冻存死细胞比例高达20％以上的细胞。
3 决定冻存量，安排需要几个冻存管。
冻存细胞在融化时要稀释10 倍，而稀释后的液体是5X种子液。
例如：如果种子液的密度为5.0 X 105 个／ ml, 那么融化后重新悬浮细胞时细胞宏物拍的密度为2. 5 X 106 个／ ml, 所以冻存细胞时的细胞密度为2.5 X 107 个／ ml 。
1 准备好冷冻培养基， 分装成1 ml, 冻存培养基通常包括一般培养基、10%~20%血清、5%~10％的甘油或二甲基亚砜。如果你不清楚用什么，那么就使用20％的血清和10％的二甲基亚砜。
2 在冷冻培养基中用移液管小心吹打粒状沉淀。
3 每个冻存管中分装1 ml 冻存培养基，放置在冰上操作。
4 把冻存管放入冻存盒中，做好标记，放入-60C 或更低温度的冰箱，放置16~24 小时。
5 倒些液氮至冰盒内，把细胞从冰箱转移到液氮罐之间要把细胞放在这样的冰盒内。如果没有现成的液氮，可以把细胞放在干冰上。
6 将细胞放置在合适的位置，立即做好记录。
液氮的使用
1 细胞常常保存在液氮罐或是液氮制冷柜中，但是要每隔几个星期补充液氮
2 自动填充液氮的罐子，必须定期检查，以保证管道的畅通以及液氮罐没有空掉。
3 在操作液氮罐内容器时要戴好厚手套，否则会冻伤手臂。
4 从液氮罐内拿出细胞时至少也应戴上乳胶手套
5 不要在液氮罐内悬吊物品，也不要吸入气化后的液氮，用手挥开液氮后，就能看见液面了。
6 戴好保护眼睛的眼罩，以免操作冻存管时，冻存管爆炸溅伤眼睛。
7 决不能把没有拧紧的管子放入液氮中，而且要提前找负责液氮罐管理的人员确定位置，不要乱放。
8 不要关闭警报，定期检查。
9 如果听到了液氮罐的报警声，立即通知实验室管理人员。如果是周末或凌晨，则先检查确认是否是由于液氮面过低或温度过高引起的报警，蔽羡再联系负责液氮罐的人员。
细胞冻存的操作步骤是什么？
1、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2、取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3、去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4、离心1000rpm，5min；
5、去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6、细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；
7、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8、冻基举存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存搏局碧管，移入液氮容器内。
注意事腊弯项
1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞用于冻存，最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液；
2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；
3、冻存和复苏最好用新配制的培养液。
如何冻存细胞
一、材料
（明模岁一）仪器
1.
净化工作台
2.
离心机
3.
恒温水浴箱
4.
冰箱（4℃、-20℃、-70℃）
5.
倒置相差显微镜
6.
培养箱
7.
液氮冰箱
（二）玻璃器皿
1.
吸管（弯头、直头）
2.
培养瓶
3.
玻璃瓶（250ml、100ml）
4.
废液缸
（三）塑料器皿
1.
吸头
2.
枪头
3.
胶塞
4.
移液管（10ml）
5.
15ml离心管
6.
冻存管（1～2ml）
（四）其他物品
1.
微量加样枪
2.
红血球计数板
3.
记号笔
4.
医用橡皮膏
5.
移液枪
（五）试剂
1.
D-Hanks液
2.
小牛血清
3.
培养液
4.
双抗（青霉素、链霉素）
5.
胰蛋白酶（0.08%）
6.
1NHCl
7.
7.4%NaHCO3
8.
DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油
二、操作步骤
（一）细胞冻存
1.
配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2.
取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶激睁把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、；
3.
离心1000rpm，5min；
4.
去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5.
将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5
ml；
6.
在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
7.
冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/
min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/
min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h
，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
（二）
细胞复苏
1.
从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2.
从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细码灶胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；
3.
离心，
1000rpm，5min；
4.
弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5.
次日更换一次培养液，继续培养。
三、注意事项
1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液；
2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；
3．冻存和复苏最好用新配制的培养液。
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