小鼠细胞原代培养?小鼠细胞原代培养时使用培养基与胎牛血清的常用比例是

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目录一览:

完全培养基可以激活小鼠原代肝细胞吗

一、实验目的:通过直接消化法分离小鼠肝细胞进行原代培养,从而得到体外培养的小鼠肝细胞,进行相关实验研究。

二、主要实验步骤:

1、 将小白鼠引颈处死后于含有75%酒精的大烧杯中浸洗10秒钟。

2、 用剪刀剪开小鼠腹部,迅速取出肝脏并将其放入装有4℃的含双抗的D- Hanks 液中进行漂洗2次,之后在培养皿中用眼科剪子将鼠肝组织剪成1mm3 左右的小块, 放入试管中, 用吸管吹打, 待组织沉淀后吸出上清, 如此反复3 次,最后一次清洗后,将试管放入离心机800rp/min离心4min。

3、 将离心后的试管取出后弃上清, 加入10倍肝组织体积的含0.2% Ⅳ型胶原酶和扰带1%PVP的消化液后,封口,4℃冰箱过夜。

4、 次日检查肝组织是否消化完全,消化完全者可用吸管吹打散开, 若消化不完全而吹打不开者,可重于37 ℃消化15min。

5、 将消化完全的悬液经200目不锈钢网过滤到培养皿中,之后将过滤后的悬液装到一个5ml离心管中,之后向过滤后的悬液中加入含10%新生牛血清的DMEM培养基到5ml, 于4℃冰箱中静置20min 。

6、 用吸管弃除悬液, 加入DMEM培养基至5ml, 以1000 转/ 分离心4min , 弃上清,如此反复3 次。

7、 最后离心完后再加入2ml含10%新生牛血清的DMEM完全培春滑养基,收集肝细胞于培养瓶中,进行台盼蓝活细胞计数;

8、 最后加入相同的完全培缓森芦养基, 调整细胞密度至5×105/ml,于37℃、5%CO2条件下培养。

10、10h 后首次换液, 换以含50ml/L的新生牛血清的DMEM培养液, 以后每48h换液一次并依次降低胎牛血清含量至1%。

小鼠原代脾细胞养了很多次都没养起来怎么办

调整方法。

1、李辩慎首先小灶激鼠原代细胞复苏贴壁少,生长慢,调整细胞密度保持哪敬在70%以上。

2、其次确保生长状态,选用高质量血清或培养基进行补救,也可以补加5%血清。

3、最后这样就可以成功养起来了。

小鼠细胞原代培养一般在哪个组织

原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。

细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细凯猜凳胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞兆哪增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。

细胞系(cell line) 是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系,不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细盯旅胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。

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